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內(nèi)參抗體可用于評價蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blot)的效率，比較凝膠中每孔的蛋白上樣量。此類對照可幫助確定樣品間表達水平的差異，以判斷是由細胞裂解物的實際蛋白水平導致，還是由上樣量的差異導致。

內(nèi)參抗體主要功能

（1）檢測整個WB流程是否正常

（2）檢測基因表達產(chǎn)物是否正確

（3）比較產(chǎn)物微量的相對變化

（4）評價各個上樣孔內(nèi)蛋白的總量是否基本一致

圖一示例

內(nèi)參抗體在目標蛋白的免疫熒光研究中，也可以作為共染的陽性對照。內(nèi)參抗體分為未標記型和標記型，標記物包括生物素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。

內(nèi)參抗體種類很多，比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Vinculin、LaminB、PCNA等，對不同樣本選擇不一樣的內(nèi)參抗體也是WB實驗成功的關(guān)鍵。本文將簡單介紹選擇內(nèi)參抗體應(yīng)遵循的五項原則：

一、樣本種屬來源：

首先要考慮實驗樣本來源于什么物種。

1. 哺乳動物的組織或者細胞樣本，通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,Katpase等。

2. 植物來源實驗樣本，則可以選擇plantactin、Rubisco等。

3. 其他來源樣本研究較少，所以就應(yīng)該參照期刊文獻數(shù)據(jù)，選擇合適的蛋白作為內(nèi)參。

二、分子量大小：

選擇內(nèi)參抗體時，應(yīng)該考慮目的蛋白分子量的大小，一般保證目的蛋白與內(nèi)參蛋白分子量相差5KD以上。例如，目的蛋白分子量為40KD，此時不適宜選擇β-actin、與GAPDH作為內(nèi)參，可以考慮選擇α-Tubulin或者β-tubulin作為內(nèi)參。

三、表達水平：

選擇的內(nèi)參蛋白需要在待測樣本中是高表達的。常用的內(nèi)參蛋白是由管家基因高表達的，是細胞發(fā)育和維持細胞活力所必須的。例如，細胞核的內(nèi)參蛋白 PCNA，在 DNA S 期表達，因此對于非增殖細胞不推薦使用。

四、目的蛋白表達定位：

五、ELK Biotechnology可選相關(guān)內(nèi)參：