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內參即是內部參照（Internal control），是指在組織和細胞中表達相對穩定的一類蛋白質，通常由管家基因編碼。這些蛋白質被用作檢測蛋白表達水平變化時的參照物，以確定實驗的準確性和可重復性。

在Western Blot實驗中，我們使用內參其實就是使用與內參對應的抗體來檢測內參的表達量。由于內參在不同組織和細胞中的表達量相對穩定，通過檢測每個樣品內參的表達量，我們可以校正上樣誤差，從而獲得更可靠的半定量結果。使用內參還可以作為空白對照，檢測蛋白轉膜情況是否完全，并檢查該實驗中的顯色或發光體系是否正常。通過選擇合適的內參，可以將這些樣本之間的差異消除或最小化，減少實驗誤差，提高結果的可靠性和可重復性。因此，選擇合適的內參是Western Blot實驗的關鍵步驟之一。

根據所做的蛋白樣本的種屬確定，哺乳動物一般β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Na+/K+-ATPase等；植物樣本一般選擇Plant actin、Rubisco等；其他來源樣本應參考文獻報道選合適蛋白作為內參。

根據研究對象的不同，選擇不同的內參對于檢測細胞中不同位置的蛋白非常重要。一般情況下，選擇β-actin和GAPDH作為總蛋白的內參就可以滿足要求。然而，對于細胞質、細胞核、細胞膜等不同位置的蛋白檢測，我們需要選擇相應的內參，以確保實驗結果具有科學性和可靠性。常用內參抗體分子量及其定位情況如下：

在選擇內參抗體時應考慮目的蛋白分子量大小，通常要求目的蛋白與內參蛋白分子量相差5kDa以上。例如，若檢測的目的蛋白分子量為45kDa，則不宜選擇分子量為42kDa的β-actin作為內參，應考慮選擇分子量為36kDa的GAPDH作為內參。

在實際的實驗環境中，處理條件可能會影響一些內參的表達，因此需要考慮研究的信號通路是否會對內參的表達產生影響。例如，在糖代謝的研究中，不能使用GAPDH作為內參，因為GAPDH是參與糖酵解過程中的酶，在某些細胞中，缺氧等條件會改變GAPDH的表達；在凋亡實驗時，Lamin等也不適合作為內參；在加入抗有絲分裂和抗真菌藥物時，Tubulin的表達易受影響，不適合作為內參等。因此，在設計實驗方案的時候應考慮這些因素并參考相關文獻，在實驗過程中，還需要留意內參表達是否出現異常等因素的考慮。