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淺析免疫共沉淀(Co-IP)原理和詳細實驗步驟教程
一、原理：免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。 其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內結合的蛋白質Y也能沉淀下來。 目前多用精制的prorein A預先結合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應后，beads上的prorein A就能吸附抗原達到精制的目的。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結
2022-06-06
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什么是ELISA--原理與分類
一、基本原理 1971年Engvall和Perlmann發表了酶聯免疫吸附劑測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術發展成液體標本中微量物質的測定方法。 這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗
2022-05-23
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內參抗體怎么選
內參抗體可用于評價蛋白質免疫印跡法(Western Blot)的效率，比較凝膠中每孔的蛋白上樣量。此類對照可幫助確定樣品間表達水平的差異，以判斷是由細胞裂解物的實際蛋白水平導致，還是由上樣量的差異導致。 內參抗體主要功能 （1）檢測整個WB流程是否正常 （2）檢測基因表達產物是否正確 （3）比較產物微量的相對變化 （4）評價各個上樣孔內蛋白的總量是否基本一致 圖一示例 內參抗體在目標蛋白的免疫熒光研究中，也可以作為共染的陽性對照。內參抗體分為未標記型和標記型，標記物包括生物素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。
2022-05-11
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ELK Biotechnology歸納Elisa實驗中樣本的制備與保存
樣品收集注意事項 1. ? 樣品收集后若在1周內進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝 （ELK Biotechnology單指標夾心法試劑盒，單孔標準上樣量為100μl?），凍存于-20℃(1個月內檢測)，或-80℃(3個月內檢測)，避免反復凍融。融化樣本在試驗前請再次離心以去除凍融后可能出現的沉淀物。 2. ? 試劑盒檢測范圍不等同于樣本的濃度范圍，如果您的樣品中檢測物濃度高于標準品最高值，請根據實際情況，做適當倍數稀釋(建議查閱文獻后先做預實驗，以確定稀釋倍數)。 3. ? 若所檢樣本不在說明書所列樣本之中，建議做預實驗驗證其檢測有效性。
2022-05-04
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通過兩種軟件計算ELISA結果
方法一：使用Curve Expert1.4軟件（點擊下載Curve Expert1.4） 標準曲線的繪制 可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標準曲線，下面以“Curve Expert1.4”軟件為例，繪制ELISA標準曲線的方法如下； 1．啟動“Curve Expert” 2．X軸輸入標準品的OD值（雙抗夾心輸入OD-空白值），Y軸輸入所對應的濃度值，如圖： 3．單擊[運行] 按鈕，出現如下對話框 4．單擊[ok
2022-05-04
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ELISA實驗操作視頻
2022-04-26
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Westernblot實驗蛋白提取
貼壁細胞總蛋白提取： 用TBS緩沖液潤洗貼壁細胞2-3次，最后一次盡量吸干殘留液。加入適當體積的細胞總蛋白提取試劑(使用前數分鐘內加入蛋白酶抑制劑)于培養板/瓶內裂解3-5min。期間反復晃動培養板/瓶，使試劑與細胞充分接觸。用細胞刮刀將細胞及試劑刮下，收集到1.5mL離心管中。冰浴30min，期間用移液器反復吹打，確保細胞完全裂解。4℃13000g離心5min，收集上清，即為總蛋白溶液。 懸浮細胞總蛋白提取： 低速離心收集細胞，加入適當體積的冷卻的PBS緩沖液重懸，2000rpm離心10min，吸除上清。重復以上操作兩次，收集細胞沉淀。加入適當體積的細胞總蛋白提取試劑(使用
2021-08-14
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引物干粉使用說明
(1)引物干粉開蓋前13000rpm，室溫離心1min。 (2)加入管壁上10倍nmole數值的水(μL)的DEPC水，渦旋混勻，瞬時離心。此為引物儲備液(100μM)，用后于-20℃保存。 *引物管上一般是3.0~6.0nmole，加入十倍這個數值微升的水(30~60μL)。 (3)取一新1.5mL EP管，加入380μLDEPC水，上下游引物儲備液各吸取10μL于新EP管中，渦旋混勻，瞬時離心。此為引物工作液(2.5μM)，可直接用于實驗，用后于4℃保存。
2021-08-14
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